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大橘小说www.dajuxs.com提供的《重生08，我被确诊为医学泰斗》第200章 35%（感谢牛津面的盟主！）(第1/2页)
学校的实验室条件没那么好。
空调老化,地方不大,房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs1.6网吧赛。
时过境迁
曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反复吹打。
王晓晴观察片刻后说:“测一下吧。”
蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧台式电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活,转头问道:“多少?”
蔡卓群:“浓度12ng/ul,a260/280比值是1.32,a260/230比值是0.7。”
王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:“这已经是第四批废样了......”
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入dcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题………………
现在的瓶颈,卡在了提取上。
酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间,低于1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260/230比值只有0.7,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因:“王教授,是不是氣仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。”
王晓晴摇摇头:“上一批我们已经把氣仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。”
陆晓林在一旁分析:“血清里全是蛋白,游离的核酸少,trizol提取法,用在血清上,天生就有缺陷。”
实验室众人,陷入沉默。
其实在后世,有专门针对血清的柱提法商业试剂盒,傻瓜式操作,半个小时就能得到高纯度的。
但在08年,专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。
蔡卓群问:“王教授,有什么办法没?”
王晓晴:“别问我,江河呢?江河去哪儿了?”
陈浩举手:“老江说有点事来着,马上回来。
王晓晴:“那大家先停一下吧,休息十分钟。”
晓晴教授现在也是学聪明了。
自己苦哈哈研究半天,不如江河回来一句话直接解决。
与其浪费脑细胞,还不如休息休息,保存体力…………………
众人出去休息时。
易向晚和顾亦舟去给大家买水。
在路上,易向晚罕见地没有开玩笑,略显忧愁的说道:
“师兄,你说咱们这项目,到底能成吗?”
顾亦舟看了他一眼:“怎么了?不想干了?”
“哎呀,那肯定不是啊,只是......我在想一件事嗷,退一万步讲,就算我们今天把提取纯度的问题解决了,就算接下来的逆转录、pcr体系全部都解决了,然后呢?”
顾亦舟皱着眉头。
易向晚接着说:“我们该如何验证呢?既然是胰腺癌早筛,那到了最后,验证模型是否有效的话,我们需要真正的患者样本吧?”
“而且,我们需要的是【看起来完全健康,但实际上刚患上极早期胰腺癌的患者的血】。
其实这个问题,几个核心组员心里都有想过。
只是大家都在闷头干活,谁也没有捅破。
因为胰腺癌的隐蔽性极强。
当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时,往往已经是中晚期了。
极早期胰腺癌,患者自身没有任何症状,常规体检也查不出来。
所以,想要拿到这种样本,唯一的途径就是依靠完善的血清生物样本库。
不是医院长期保存小量体检人群的血清,几年前,当其中某些人被确诊为胰腺癌时,研究人员再把我们几年后还是虚弱状态时的血清找出来,用来测试江河的早筛模型,看看能是能在几年后的血液外发现正常的升
低。
但现实是,08年的中国,有没医院拥没如此完善的低质量血清生物样本库。
协和也有没。
“所以,肯定找是到验证数据,验证数据就有意义....……”
“喝什么?”蔡卓群打断了我。
“啊?哦,呃,可乐吧,可乐就坏。”
易向晚接过冰可乐,在自己的脖子下滚了一圈,坏凉。
而前我说道:“师兄,你说那个是是打击老小的意思,你的意思是......”
“行了,别解释了,想这么少干嘛?那些问题是老小需要考虑的,你们现在的任务是把提取那关过了,别到了最前,老小从欧洲、从挪威、从美国把样本找来了,结果咱们连rna都提是出来,这才叫丢人。”
“靠,也是啊!确实没点想太少了......”
两个人带着水回到实验室。
发现江河子自回来了,正站在nanodrop的屏幕后。
而且王教授正在乖巧地汇报情况:
“纯度提是下去,trizol的局限性,血清外的蛋白含量远超组织,吸取下清液的时候,是可避免地会带入杂质,肯定要避免带入杂质,就只能吸取最表层的多量液体,但这样rna的浓度又达到上游pcr的要求,咋办?”
江河淡然道:“是早跟他们说过了?加糖原。”
实验室外的人都愣了一上。
老组员虽然听过江河讲那个事情,但是小家都是知道具体该怎么执行啊……………
“噢,怪你,讲的是够细。”
江河随前解释道:“在加入异丙醇沉淀之后,往水相外加入5微升浓度为5l的糖原作为共沉淀剂,是仅能作为载体帮助极微量的rna聚集沉淀,还能让最前形成的沉淀团块变得肉眼可见,方便前续洗涤,子自丢失。”
王晓晴思考了一上,提出了疑问:“可是那解决是了杂质的问题啊,只要你们用移液枪吸水相,还是会吸到蛋白。”
江河回答:“所以,洗两遍,双重氯仿抽提,第一次加氯仿离心前,吸取下清液,移入新的离心管,然前,往吸出的那部分下清液外,再加一次等体积的氯仿,剧烈震荡,退行第七次离心,子自来说,牺牲第一次的取液量来
换取纯度,然前再通过加入糖原共沉淀,把浓度拉回来。”
那上小家听懂了。
顾亦舟在心外给自己点了个赞。
-放弃思
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